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不同处理组织的方法对提取RNA产量的影响

提供者:上海远慕生物科技有限公司   发布时间:2018/9/27  阅读次数:157次   进入该公司展台

实验方法原理:   

RNA 提取过程中最应注意的是:组织或细胞在变性液中完全裂解的同时,如何抑 RNase 引起的 RNA 降解问题。在直接加工新鲜组织时,所有的细胞能尽可能快的接触变性剂以完全裂解这一步是相当重要的。一些难以加工的组织,例如:坚硬的肿瘤、细菌细胞、植物根部等,即使使用匀浆器一般也不能很有效的裂解。此时,通常可以在处理组织时,先对其进行冷冻处理,以使之充分裂解。


为使迅速冷冻样品,以使整块组织彻底冷冻,因此,在冷冻前应先将组织切成小块,然后将其浸没于液氮中。这将会使组织块以最快的方式冷冻。另外,也可将一个金属盘置于干冰上作为冷冻的表面,以对片状的组织进行快速的冷冻。

下面三种力法分别描述用三种不同的方式加工 0.lg 冷冻的小鼠肝脏组织,以产生组织/细胞裂解产物。裂解产物可进行 RNA 的提取纯化,或用于估计 pdy(A)+RNA 的产量。虽然这三种方法同是利用胍缓冲液以彻底裂解细胞,但是它们在先前的步骤中,即如何加工组织或是在如何裂解的过程中有所不同。




实验步骤    

方法一: 在匀浆器中加工冷冻的组织

产量:4.1ugpoly(A)ˉRNA

冷冻的组织在干冰上被切成大约 Cl5 cm2 的小片,转人匀浆器中,一边缓缓加入裂解缓冲液一边不断的匀浆。

方法二:通过注射器加工冷冻的组织。

产量:3.2ugpoly(A)-RNA。

冷冻的组织在干冰被切成大约 0.5 cm2 的小片,一边缓缓加人裂解缓冲液一边通过 18 号的标准注射针头反复抽打十次。

方法三:在液氮中将组织研磨成粉末。

产量:7.1ugpoly(A)ˉRNA。

将冷冻的样品放在研钵中进行剧烈研磨以使其粉碎。当组织被磨成粉状后,向研钵中加人变忭缓冲液,并搅拌均勻。混合物融化后应转移到合适的容器中进行进一步的操作。在液氮中研磨组织至粉末状,细胞的裂解则更完全,因此能得到比前两种方法多近一倍的产量。

可见,即使对于 N—种组织,采用同一种试剂进行 RNA 的提取,仅仅由于组织样品处理方法的不同,就导致了 RNA 提取量的显著差异。因此,在对不同的组织进行 RNA 提取时,不仅要选择最合适的提取方法,同时也要根据所处理的组织,以及提取目的以选择最为合适的组织处理方法,只有这样才能获得最佳效果。

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